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    息半夏皮乙醇提取物对小菜蛾的杀虫活性

    时间:2023-01-20 17:15:13 来源:天一资源网 本文已影响 天一资源网手机站

    谷清义 刘林东 王博宇 黄雅琴 张耀洲 肖 颖 陈 琼

    (信阳农林学院制药工程学院,河南信阳 464000)

    半夏为天南星科植物,是中国传统中药材,以块茎入药,具有燥湿化痰、降逆止呕、消痞散结的功效。据《中国土农药志》和《中国有毒植物》记载,半夏对青虫、蚜虫、桑蛾等害虫具有较好的毒杀作用[1-2]。研究发现,半夏块茎提取物对小菜蛾、棉蚜、桃蚜具有较好的杀虫活性[3-6];
    付士龙等[7]研究发现,半夏块茎提取物对甜菜夜蛾幼虫有一定的毒杀作用。顾地周等[8]研究发现,半夏提取液对大豆蚜虫具有较好的拒食和触杀作用。宋珊珊等[9]研究发现,半夏提取物对二斑叶螨具有较好的杀虫活性。据统计,半夏皮约占整体鲜重的1/10。许宏亮等[10]研究发现,半夏皮中有效成分除水溶性蛋白外,总有机酸、总生物碱和总还原性糖含量均高于块茎。白权等[11]研究表明,半夏皮及须根总生物碱含量远高于半夏块茎。国内学者在半夏杀虫研究中多使用半夏去皮块茎,鲜有涉及半夏皮。笔者以信阳市当地息半夏皮为原料,用乙醇提取皮内物质,以小菜蛾为供试昆虫,测定息半夏皮内提取物对小菜蛾幼虫的杀虫活性及作用方式,以期为进一步挖掘息半夏资源利用新途径和利用半夏皮开发新型植物源杀虫剂提供参考。

    1.1 试验材料

    1.1.1 供试材料。供试息半夏皮采自息县田间野生半夏。剥下半夏成熟块茎的皮部,用清水冲洗干净,自然条件下晒干,用高速粉碎机粉碎,过40目筛后备用。

    1.1.2 仪器及试剂。6202型高速粉碎机,由北京环亚天元机械技术有限公司制造;
    RE-2000型旋转蒸发仪,由上海亚荣生化仪器厂生产;
    95%乙醇,由天津恒兴化学试剂制造有限公司生产。

    1.1.3 供试虫源。小菜蛾为信阳农林学院养虫室继代饲养的敏感品系3龄幼虫。饲养条件为室内温度(26±1)℃,光周期为光照 14 h、黑暗 10 h,相对湿度为70%~80%。

    1.1.4 息半夏皮提取物的制备。准确称取50 g半夏皮粉末,使用95%乙醇索氏提取法提取10 h,将提取液转入旋转蒸发仪中,减压浓缩至稠膏状,将稠膏状提取物用水分别稀释成100、50、25 mg/mL,然后分别装入棕色广口瓶中,置于4℃冰箱中备用。

    1.2 试验方法

    1.2.1 拒食活性测定。采用浸渍叶碟法[12],分别进行选择性拒食试验和非选择性拒食试验。用打孔器将新鲜干净的甘蓝叶片打成直径1.5 cm的叶碟,分别放入不同浓度梯度药剂稀释液和清水对照中浸泡5 s后取出,待叶碟表面的溶液挥发干后放入直径为9 cm、有滤纸保湿的培养皿中。选择性拒食试验每个培养皿中等距放置4个叶碟,药剂稀释液和清水对照各2个叶碟,十字交叉排列;
    非选择性拒食试验每个培养皿中等距放置4个药剂处理的叶碟,另设清水对照。每个培养皿中接入饥饿处理24 h的3龄中期幼虫5头,作为一个重复。6次重复。把培养皿置于温度(26±1)℃,光周期为光照 14 h、黑暗 10 h,相对湿度70%~80%的培养箱中培养。分别于24 h与48 h后观察,并用坐标纸测量被取食的叶片面积。计算拒食率,然后将拒食率转化为概率值、浓度转化成对数后进行线性回归,计算拒食中浓度(AFC50)。相关计算公式如下:

    1.2.2 触杀活性测定。共设4个药液浓度处理,分别为 100 mg/mL、50 mg/mL、25 mg/mL 和 0 mg/mL(清水对照,CK)。采用浸虫法[13],分别将小菜蛾3龄幼虫放入圆桶状滤网中在不同浓度梯度药液中浸泡5 s,取出后用滤纸吸干多余药液,自然晾干。用打孔器将新鲜干净的甘蓝叶片打成直径1.5 cm的叶碟,放入有滤纸保湿、直径为9 cm的培养皿中,每个培养皿中放30头,3次重复。把培养皿置于温度(26±1)℃,光周期为光照14 h、黑暗10 h,相对湿度为70%~80%的培养箱中培养。分别于24、48、72 h观察幼虫死亡情况,计算死亡率和校正死亡率。相关计算公式如下:

    1.2.3 胃毒活性测定。共设4个药液浓度处理,分别为 100mg/mL、50mg/mL、25mg/mL 和 0mg/mL(清水对照,CK)。用打孔器将洁净甘蓝叶片做成直径1.5 cm的叶碟,分别将叶碟放入不同浓度梯度药液中浸泡5 s后取出,自然晾干,放入直径为9 cm、有保湿滤纸保湿的培养皿中,每皿8个叶碟。然后接入饥饿处理24 h的小菜蛾3龄幼虫,每皿30头,3次重复。把培养皿置于温度(26±1)℃,光周期为光照14 h、黑暗10 h,相对湿度为70%~80%的培养箱中培养。分别于24、48、72 h观察幼虫死亡情况,计算死亡率和校正死亡率。相关计算公式同上。

    1.3 数据处理

    试验数据利用SPSS 22.0统计分析软件进行处理及差异显著性分析。

    2.1 息半夏皮提取物对小菜蛾幼虫拒食活性的影响

    息半夏皮乙醇提取物对小菜蛾3龄幼虫的拒食活性测定结果见表1、2、3。结果显示:选择性拒食试验中,100 mg/mL药液处理后24 h小菜蛾幼虫拒食率达到82.44%,48 h拒食率为79.54%;
    24 h和48 h的 AFC50值分别为 30.89、38.71 mg/mL。

    50、25 mg/mL药液处理在24 h和48 h的拒食率均低于100 mg/mL处理,且差异显著(P<0.05)。在非选择性拒食试验中,100 mg/mL药液处理后24 h和48 h小菜蛾幼虫拒食率分别为81.33%和81.64%,AFC50值分别为24.63、26.54 mg/mL。100 mg/mL药液处理后24 h和48 h小菜蛾幼虫拒食率均高于50、25 mg/mL药液处理,且差异显著(P<0.05)。

    表1 息半夏皮提取物对小菜蛾幼虫选择性拒食活性

    表2 息半夏皮提取物对小菜蛾3龄幼虫非选择性拒食活性

    表3 息半夏皮乙醇提取物对小菜蛾3龄幼虫拒食作用回归分析

    2.2 息半夏皮提取物对小菜蛾幼虫的触杀活性

    由表4可知,100 mg/mL药液处理后24、48、72 h小菜蛾幼虫的校正死亡率分别为28.67%、46.89%、65.87%,其中药后72 h校正死亡率最高。50 mg/mL和25 mg/mL药液处理后24、48、72 h小菜蛾幼虫校正死亡率均明显低于100 mg/mL药液处理,且差异较为显著(P<0.05)。

    表4 息半夏皮提取物对小菜蛾3龄幼虫的触杀活性

    2.3 息半夏皮提取物对小菜蛾幼虫的胃毒活性

    由表5可知,100 mg/mL药液处理后24、48、72 h小菜蛾幼虫的校正死亡率分别为31.11%、57.47%、71.42%,其中药后72 h校正死亡率最高。50 mg/mL和25 mg/mL药液处理后24、48、72 h小菜蛾幼虫的校正死亡率均明显低于100 mg/mL药液处理,且差异较为显著(P<0.05)。

    表5 息半夏皮提取物对小菜蛾3龄幼虫的胃毒活性

    半夏为大别山地区重要的中药材,以信阳市息县半夏最为道地,故称息半夏。本试验采用息半夏皮作为材料,用乙醇提取皮内毒性成分,测试其对小菜蛾的生物活性。试验结果表明,息半夏皮乙醇提取物 3 个浓度处理(100、50、25 mg/mL)对小菜蛾幼虫的拒食作用最好的为100 mg/mL,说明拒食作用与药液浓度成正比。选择性拒食试验和非选择性拒食试验结果表明,100 mg/mL药液处理药后24 h小菜蛾幼虫的拒食率分别达82.44%和81.33%,拒食作用明显。顾地周等[8]研究表明,半夏乙醇提取物对蚜虫具有较好的拒食作用,但提取物中起拒食作用的具体成分还有待进一步研究。息半夏皮乙醇提取物对小菜蛾具有一定的触杀和胃毒活性。本试验结果表明,100 mg/mL药液处理下,药后72 h触杀作用的校正死亡率为65.87%,而同时间段内胃毒作用的校正死亡率为71.42%,说明胃毒作用效果优于触杀作用,与付士龙[14]的试验结果相符。本试验中,100 mg/mL药液处理胃毒作用的校正死亡率略高于李进步等[3]利用半夏块茎乙醇提取物对小菜蛾幼虫的杀虫活性结果。

    本研究仅明确了息半夏皮提取物对小菜蛾的杀虫活性及有效作用方式,而主要杀虫成分对小菜蛾幼虫的杀虫机理尚未明确,需要进一步研究。

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